13 
10 мин
Введение
Цитологическое исследование (т. е. изучение поражений на клеточном уровне) обладает высокой эффективностью и широко используется практикующими ветеринарными врачами для диагностики и оценки ряда патологических процессов, включая воспаление, травмы, инфекции, гиперплазию, новообразования.
Этот метод отличается относительной простотой, доступной стоимостью, надежностью, минимальной инвазивностью и быстротой (Блок 1) и обычно применяется при тонкоигольной аспирации объемных образований неясного генеза, опухолей или других поражений любой локализации (Рисунок 1).
Кроме того, он позволяет оценить клеточный состав соскобов с поражений кожи, мазков с поверхности слизистых, мазков-отпечатков на предметных стеклах с поверхности поражений, биоптатов тканей или с поверхности тканей.
Его также часто применяют для исследования смывов из носа, трахеи, бронхов и альвеол, при катетеризации мочевого пузыря и предстательной железы, а также для аспиратов жидкостей из полостей тела и суставов. Метод тонкоигольной аспирации под контролем ультразвукового исследования все шире используют для оценки поражений внутренних органов, таких как печень, селезенка и почки.
Плюсы и минусы цитологического исследования
Цитологические данные в значительной степени коррелируют с результатами гистопатологического исследования биоптата тканей.
Однако, по сравнению с гистологическим, цитологическое исследование обеспечивает значительно меньший выход клеток и меньше информации об архитектонике и межклеточном взаимодействии в ткани.
При цитологическом исследовании можно увидеть некоторые важные особенности архитектоники, такие как палисадоподобные пласты в базально-клеточных опухолях, связь с капиллярами в липомах и гемангиоперицитомах, ацинарные и тубулярные структуры и внеклеточный матрикс в секреторной ткани, а также папиллярные образования в эпителиальных тканях.
.png "FOCUS (1).png")
Однако для диагностики некоторых заболеваний, таких как гемангиоперицитома, может потребоваться информация, получаемая с помощью именно цитологического исследования, которое позволяет оценивать материал на уровне отдельных клеток и их морфологии.
При этом в хорошо подготовленных цитологических образцах не наблюдается сморщивания и других артефактов фиксации формальдегида, обнаруживаемых при гистологическом исследовании.
Эта особенность цитологического исследования актуальна при диагностике, основанной по большей части на оценке размера клеток, например при лимфоме.
В большинстве случаев практикующие ветеринарные врачи обладают достаточными навыками и знаниями, чтобы получать и обрабатывать образцы для цитологического исследования, а затем проводить их микроскопическую оценку, хотя при неаккуратной обработке образцы могут оказаться неинформативными (Блок 2).
По всей вероятности, воспалительные поражения идентифицировать легче всего (Блок 3), поскольку для этого в основном достаточно правильно распознать типы попавших в очаг клеток крови и образовавшиеся макрофаги, а также оценить степень тяжести поражения.
.png "tabl2 (1).png")
Клетки определенных тканей легко распознать по морфологическим признакам — например, около 80% опухолей кожи подразделяются всего на 10 клеточных типов, — и практикующие врачи могут быстро научиться трактовать наиболее распространенные цитологические данные и направлять к специалисту те образцы, для анализа которых требуется больше опыта.
Кроме того, в последние пару десятилетий в широком доступе появилось огромное количество полезных учебников, руководств, атласов и другой литературы, ориентированной на практикующих врачей, как в бумажном, так и в цифровом виде.
За это время также значительно усовершенствовались технологии и знания, особенно в области получения, анализа и хранения высококачественных микроскопических изображений.
.png "tabl2 (2).png")
Для получения, обработки и окрашивания мазка достаточно микроскопа, мобильного телефона, компьютера, цветного атласа и клинической центрифуги; другого оборудования не требуется.
Следует также отметить, что роль цитологического исследования для клинико-патологической работы ветеринарных клиник возросла и с управленческой и финансовой точки зрения.
Кураторы обучения и аттестационные эксперты в области клинической патологии часто отмечают, что цитологические исследования становятся все более привлекательными для врачей-резидентов, которые достигают в этой области больших успехов по сравнению с другими областями клинической патологии — биохимией, общей патологией, гематологией и лабораторным менеджментом.
Эффективные получение и визуализация образцов
Как правило, при единичном поражении врачи отправляют в лабораторию 1–4 мазка. Оценивают насыщенность клетками, сохранность клеток, признаки воспаления (Блок 4) и злокачественного поражения (Блок 5).
Качество образцов считают подходящим для диагностики, если они достаточно насыщены клетками и правильно зафиксированы, при этом клетки хорошо распределены, а примесь крови минимальная.
Образцы обычно получают путем аспирации, но иногда просто введением иглы — когда клетки легко отделяются, например при лимфомах.
.png "tabl2 (3).png")
Аспирацию иглой калибра 22–23G в шприц объемом 20 мл производят несколькими возвратно-поступательными движениями поршня, стараясь извлечь клетки из более крупной и более репрезентативной области поражения.
Аспирированное содержимое выливают на предметные стекла, удерживая иглу под углом 45 градусов.
В идеале мазок получают, расположив поверх предметного стекла второе и медленно сдвигая его по горизонтали с минимальным вертикальным давлением; затем мазок быстро высушивают на воздухе в течение ~30 секунд или помещая его под мощный вентилятор или фен. Это предотвращает сморщивание и растворение клеток.
Световую микроскопию лучше всего проводить с помощью тринокулярного микроскопа, оснащенного подключенной к компьютеру цифровой камерой для получения множественных изображений.
В качестве альтернативы можно получить увеличенные изображения клеток с помощью камеры мобильного телефона с функцией увеличения (Рисунок 3).
.png "FOCUS (2).png")
Микрофотографии следует оптимизировать в цифровом формате, настроив яркость, контрастность и баланс белого, чтобы устранить типичный искажающий желтый цвет фона. Изображения должны быть кадрированы в пределах соответствующих диагностически значимых признаков.
Различные бесплатные пакеты программного обеспечения для обработки изображений позволяют автоматически создавать коллажи из 4–16 оптимизированных изображений с различными диагностически значимыми признаками, что позволяет более полно и точно оценивать мазок и тем самым облегчает диагностику (Рисунок 4).
Коллажи диагностических изображений можно в цифровом виде перенести в отчеты в виде файлов jpeg, совместно анализировать в программах конференц-связи в режиме реального времени или сохранить для сравнения или изучения в будущем.
Цитологическое исследование начинают с тщательного осмотра предметного стекла для предварительной оценки достаточности или избытка клеток, выявления любых загрязнений кровью/липидами, любых макроскопических структур (например, скоплений клеток, личинок) и любых явных артефактов приготовления/высыхания мазка.
Затем проводят прямую микроскопию на трех уровнях увеличения, пошагово: 1) ~10–20-кратное увеличение для полного просмотра крупных структур, оценки архитектоники, выявления наиболее диагностически значимых областей; 2) ~40–60-кратное увеличение для дальнейшего уточнения деталей; 3) 100-кратное увеличение с масляной иммерсией для детального осмотра клеток и их внутренней морфологии.
.png "FOCUS (3).png")
Цитологическое исследование и новообразования
Обзор образцов, представленных в университетскую лабораторию авторов, дает некоторые интересные статистические данные и демонстрирует пользу цитологического исследования при проведении обследования для выявления опухоли. Около 95% из 7560 образцов (из них 62% внутри клиники, а 38% — из внешних клиник) были получены у собак.
В общей сложности 14% образцов оказались диагностически незначимыми из‑за недостаточного выхода интактных клеток (Блок 2); 19% пригодных для анализа предметных стекол относились к опухолям (64% — к злокачественным), остальные в основном были воспалительными.
Из трех цитологических категорий новообразований чаще всего встречались мезенхимальные опухоли (42%), из которых 98% были выявлены у собак и 2% у кошек; реже — круглоклеточные опухоли (32%), из которых 88% были выявлены у собак и 12% у кошек; и еще реже — эпителиальные опухоли (26%), из которых 93% были выявлены у собак и 7% у кошек.
У собак 30% опухолей составили лимфомы, 27% — карциномы, 26% — саркомы, 13% — мастоцитомы и 4% — нейроэндокринные опухоли.
Доброкачественные опухоли у собак в 65% случаев были представлены липомами, в 16% — аденомами, в 7% — гистиоцитомами и в 5% — гемангиоперицитомами.
Случаев доброкачественных опухолей у кошек было слишком мало для оценки, но было выявлено 75 случаев злокачественных опухолей: 52% составили лимфомы, 30% — карциномы, 9% — саркомы, 4% — мастоцитомы и 3% — нейроэндокринные опухоли.
На первую пятерку от общего числа диагностированных опухолей у собак приходилось 84%, у кошек — 98%. Наиболее частым цитологическим диагнозом среди новообразований у собак была липома (в сторонних ветеринарных клиниках ее диагностировали в два раза чаще), но у кошек она встречалась редко (n=1). Мастоцитомы у собак встречались в два раза чаще (8%), чем у кошек (4%).
Лимфому, наиболее распространенное новообразование у кошек, у собак диагностировали в два раза реже. Более 1/3 случаев рака приходилось на саркомы и карциномы, и в нашей специализированной клинике их диагностировали в три раза чаще.
Критерии злокачественности
Диагностировать злокачественные опухоли (рак) крайне важно. Цитологически большинство злокачественных новообразований можно диагностировать по выявлению в значительной части клеток по крайней мере трех критериев (Блок 5).
Доброкачественные опухоли характеризуются сходством клеток по внешнему виду. Напротив, раковые клетки характеризуются широким разнообразием формы и размера клеток, их ядер и ядрышек. Обычно их описывают терминами с греческими префиксами (например, плео-, анизо-, макро-, ксено-, гипер-), и значения этих префиксов полезно запомнить.
Классификации опухолей
Злокачественные опухоли в цитологии по происхождению и морфологии подразделяют на три группы:
1. Мезенхимальные опухоли (если злокачественные — это саркомы) обычно насыщены клетками слабо или умеренно, при этом клетки расположены поодиночке или в неплотных скоплениях со слабо очерченными границами, иногда в сочетании с розовым внеклеточным матриксом. Отдельные клетки характеризуются веретенообразной формой, слегка удлиненными овальными ядрами и умеренным количеством бледно-базофильной цитоплазмы, часто с одно-/биполярными отростками. Иногда в цитоплазме выявляют точечные мелкие красные грануляции.
2. Эпителиальные опухоли (если они злокачественные — это карциномы), как правило, состоят из круглых или полигональных клеток с круглым ядром и обильной базофильной цитоплазмой; клетки отслаиваются пластами. Границы клеток четче, чем при саркоме, но менее четкие, чем при круглоклеточных опухолях.
3. Дискретные круглоклеточные опухоли легко слущиваются, поэтому при получении образцов часто обнаруживают большое количество отдельных клеток. Иногда они объединяются в крупные многослойные скопления со слабо- или вообще не выраженными внутриклеточными структурами. Большинство типов круглых клеток легко разрываются при изготовлении препарата, поэтому образцы требуется обрабатывать с особой осторожностью.
Заключение
Получение и обработка образцов, а также их микроскопическая оценка являются относительно базовыми навыками, их легко применять в ветеринарной клинике, и роль цитологического исследования в диагностике заболеваний мелких животных становится все более значительной.
Проще всего поддаются идентификации воспалительные поражения, поскольку для этого требуется в основном распознать типы клеток крови; опухолям также во многих случаях свойственны типичные характеристики, позволяющие их идентифицировать.
Практикующие ветеринарные врачи могут быстро освоить диагностику наиболее распространенных цитологических изменений, а образцы с более сложными случаями направлять к специалисту.
Литература
-
1.O’Brien PJ, Lumsden JH. The cytological examination of body cavity fluids. Sem. Vet. Med. Surg. Small Anim. 1988;3:140-156.
-
2.Metcalfe LVA, O’Brien PJ, Papakonstantinou S, et al. Malignant melanoma in a grey horse: case presentation and review of equine melanoma treatment options. Ir. Vet. J. 2013;66:22-26.
-
3.Papakonstantinou S, O’Brien PJ. High content imaging for the morphometric diagnosis and immunophenotypic prognosis of canine lymphomas. Cytometry: Part B – Clinical Cytometry Doi: 10.1002/cytob.21170; 2014.
-
4.Domingos M, Davies AM, O’Brien PJ. Application of high content analysis in clinical cytology for translational safety biomarkers of drug-induced toxicity for lymphoma chemotherapy. Basic Clin. Pharmacol. Toxicol. 2014;115:145-153.
-
5.Balan M, O’Brien PJ, McCullough M. Marked paraneoplastic basophilia accompanying eosinophilia in a cat with alimentary T-cell lymphoma. J. Feline Med. Surg. Open Reports 2017;3(2):1-6.
-
6.Balda IO, O’Brien PJ, Mullins RA, et al. Intraoperative impression smear cytology to guide successful treatment of a large renal cyst in a dog: a case report. J. Vet. Sci. 2022;23(2):e34.
-
7.Martínez-Caro J, O’Brien PJ. Novel, diagnostic, cytomorphometric profile of canine, classical haemangiopericytoma: including nuclear criteria of malignancy. Comp. Clin. Pathol. 2023;32(2):299-310.
«Диагностическая цитология для практикующих врачей »!
Заработанные баллы
были начислены ранее
60 
