Цитология круглоклеточных опухолей у собак

Многие из них морфологически проявляются «крупноклеточной лимфомой», но могут сильно различаться по симптомам и точным иммунофенотипам (от вялотекущих до агрессивных форм), а следовательно, и по прогнозу.

В этой статье мы в основном обсудим несколько типов лимфом, различающихся по цитологическим признакам, которые при цитологическом исследовании можно распознать без проведения дополнительных исследований.

Знание этих особенностей позволяет приблизительно оценить диагноз и прогноз, однако для полной классификации и установления окончательного диагноза требуется сочетание цитологического, гистологического, иммуногистохимического исследований и расширенных методов молекулярного тестирования (например, проточной цитометрии).

Крупноклеточная или средне-крупноклеточная лимфома: в основном состоит из лимфоцитов от среднего до крупного размера (более чем в 2–3 раза превышающих размер эритроцитов). Этот тип лимфомы в описаниях цитологического исследования встречается чаще всего. Обычно в крупных опухолевых лимфоцитах наблюдается высокое ядерно-цитоплазматическое отношение (ЯЦО, nuclear-to-cytoplasmic — N:C) и количество базофильной цитоплазмы от небольшого до мизерного (Рисунок 3). На основании клинической картины и иммунофенотипа лимфомы подразделяют на диффузную крупноклеточную В-клеточную лимфому (Diffuse Large B Cell Lymphoma — DLBCL) и на периферическую Т-клеточную неуточненную лимфому (Peripheral T Cell Lymphoma Not Otherwise Specified — PTCL-NOS).

Диффузная крупноклеточная В-клеточная лимфома (Diffuse Large B Cell Lymphoma — DLBCL): наиболее частый тип лимфомы у собак, обычно развивающийся у животных среднего и старшего возраста; медианный возраст начала заболевания — около 7–9 лет. У некоторых пород, включая золотистых ретриверов, лабрадор-ретриверов, бернских зенненхундов и немецких овчарок, риск выше. Лимфома собак обычно проявляется генерализованной лимфаденопатией. Медиана выживаемости — около 300–500 дней (2).

Периферическая Т-клеточная неуточненная лимфома (Peripheral T-Cell Lymphoma Not Otherwise Specified — PTCL-NOS): на долю PTCL-NOS приходится примерно 15% всех случаев лимфомы у собак. Этот тип лимфомы чаще всего встречается у собак породы боксер среднего возраста и несколько более распространен у кобелей. Заболевание часто поражает лимфатические узлы средостения и может сопровождаться гиперкальциемией. К сожалению, прогноз при PTCL-NOS неблагоприятный, с медианной продолжительностью жизни всего около 158 дней (2). Учитывая цитологическое сходство и прогностические различия DLBCL и PTCL-NOS, для подтверждения диагноза настоятельно рекомендуется провести проточную цитометрию или гистологическое исследование с иммуногистохимическим окрашиванием.

Лимфома Т-зоны (T-Zone Lymphoma — TZL): мелко-среднеклеточная лимфома с более благоприятным, чем у других типов, прогнозом. При цитологическом исследовании в этом случае часто выявляют клетки в форме «ручного зеркальца» или «головастика» (Рисунок 4). Однако для окончательной диагностики необходима проточная цитометрия, поскольку в клетках TZL, как правило, выявляют клеточные маркеры CD3, CD5, CD21 и MHC II (3). При этом типе лимфомы в патологический процесс часто вовлекается кровеносная система, что приводит к лимфоцитозу. Заболевание обычно встречается у золотистых ретриверов, мальтезе и ши-тцу. Вялотекущий (индолентный) характер TZL означает более высокую медианную продолжительность жизни, которая может достигать 637–760 дней (3).

Лимфома из больших гранулярных лимфоцитов (Large Granular Lymphocyte (LGL) Lymphoma, крупная гранулярная лимфома — КГЛ): характеризуется появлением цитотоксических Т-клеток или естественных киллеров (NK-клеток) с цитоплазматическими гранулами цветом от розового до пурпурного, содержащими ферменты, такие как перфорин и гранзимы. У собак этот тип лимфомы в основном обнаруживается в печени и селезенке, реже — в желудочно-кишечном тракте или диссеминированно.

Диагноз обычно подтверждают цитологически, поскольку из‑за того, что при гистологическом методе исследования плохо прокрашиваются гранулы, этот тип лимфомы часто принимают за лимфому низкой степени злокачественности. Течение заболевания агрессивное, медиана выживаемости составляет всего 28 дней, несмотря на то, что около 75% собак реагируют на первый курс химиотерапии. При цитологическом исследовании положительным прогностическим фактором является обнаружение средних лимфоцитов (по сравнению с крупными лимфоцитами), что у некоторых пациентов коррелирует с медианой выживаемости более 100 дней (4).

Лимфома маргинальной зоны (Marginal Zone Lymphoma — MZL): лучше всего диагностируется ггистологическим методом, хотя заподозрить ее можно и при цитологическом исследовании, выявив единичное четко выраженное ядрышко. Прогноз при этом типе лимфомы различный, в зависимости от пораженного органа. При поражении только селезенки долгосрочный прогноз после спленэктомии может быть благоприятным, при поражении же лимфатических узлов процесс приобретает агрессивное течение, как при DLBCL (2).

Рисунок 3. Крупноклеточная лимфома из объемного образования в желудочно-кишечном тракте. Опухолевые лимфоциты крупнее нейтрофилов, отличаются высоким соотношением N:C и малым объемом базофильной цитоплазмы. (Увеличение 40x)

Рисунок 4. Лимфома Т-зоны. Опухолевые лимфоциты имеют размер от мелкого до среднего. У них часто видны цитоплазматические отростки, напоминающие ручные зеркальца или головастиков. (Увеличение 40x)

Цитологические особенности
Цитологически MCT характеризуются расположенными в центре клеток круглыми ядрами с фиолетовыми внутриклеточными гранулами различных размеров и количества. Обратите внимание, что при окрашивании в клинике красителем на водной основе по Романовскому (например, красителем Diff-QuikTM) гранулы можно не заметить (Рисунок 6). MCT также часто сопровождается скоплениями коллагеновых волокон, эозинофилов и фибробластов.

Рисунок 6. Различная выраженность гранул в клетках мастоцитомы (MCT) при окрашивании Diff-QuikTM (а) и окрашивании по Гимзе (b). Отсутствие видимых гранул может помешать практикующим ветеринарным врачам и даже неопытным цитологам диагностировать мастоцитому. (Увеличение 50x).

Цитологическая классификация
Цитологическая оценка является важнейшим компонентом диагностики МСТ и позволяет определить, насколько нормальными или аномальными выглядят раковые клетки под микроскопом, что дает возможность провести классификацию опухоли. Как правило, чем более аномальными выглядят клетки, тем агрессивнее рак и тем быстрее он может расти и распространяться. 

При цитологической оценке кожи собак на наличие MCT используют ряд критериев, основанных на морфологических характеристиках опухолевых клеток, включая кариомегалию, многоядерность, ядерный плеоморфизм, фигуры митоза. 

Недавно была опубликована статья о стадировании МСТ не только на основе набора критериев, но и с помощью цитологической идентификации грануляции (6). По сути, слабая грануляция при цитологическом исследовании указывает на высокую степень злокачественности, но при высокой гранулированности клеток соответствие по крайней мере двум из следующих критериев также указывает на высокую степень злокачественности MCT (Блок 1): 

1. Наличие фигур митоза
2. Полиморфизм ядер (изменение размера и формы ядра)
3. Двухъядерные или многоядерные клетки
4. Анизокариоз, то есть значительная (> 50%) неоднородность размеров ядер 

Недавно специалисты предложили новую цитологическую классификацию (7). Оказалось, что окрашивание по Романовскому позволяет дополнительно оценивать наличие фибробластов и коллагеновых фибрилл. 

Умеренное или интенсивное скопление этих элементов свидетельствует о более доброкачественном характере заболевания, сопровождающемся более высокой выживаемостью и более низкой гистопатологической оценкой.

Блок 1. Классификация MCT по степени грануляции клеток и другим критериям (из (6)).

Гистиоцитомы — доброкачественные опухоли кожи, чаще всего встречающиеся у собак в возрасте до двух лет. Они проявляются одиночными куполообразно возвышающимися плотными образованиями преимущественно на голове и конечностях и часто изъязвляются.

При микроскопии эти опухоли напоминают яичницу-глазунью, с бледно-голубой или бесцветной цитоплазмой и небольшим количеством фигур митоза (Рисунок 8). Гистиоцитомы часто спонтанно регрессируют без лечения.

Рисунок 8. Гистиоцитома на носу у четырехлетнего сиба-ину. При осмотре (а) отчетливо видна куполообразная форма гистиоцитомы. При цитологическом исследовании (b) морфология напоминает яичницу-глазунью. Обратите внимание на слабую лимфоцитарную инфильтрацию, указывающую на регресс патологического процесса. (Увеличение 40x).

К круглоклеточным опухолям у собак относят широкий ряд новообразований, довольно часто встречающихся в ветеринарной практике. Каждый тип обладает уникальными характеристиками, и подходы к их диагностике и лечению различаются.

Понимание цитологических особенностей этих опухолей необходимо ветеринарному врачу для точной диагностики, оценки прогноза и разработки терапевтических стратегий эффективного лечения этих заболеваний у собак.